少女 自慰 AAV助力视神经和脊髓毁伤的种植，再添新战术
在成年哺乳动物中，堵截的CNS轴突不成再生少女 自慰，何况莫得灵验的再生战术。在发育经由中，神经元冉冉失去延迟其轴突的助长时代，很猛进度上导致受损CNS神经元的种植失败。包括PTEN、Krüppel样因子、c-myc和SOX11在内的基因不错转换闇练神经元的内在助长时代，但这些基因靶点皆莫得转动为临床诈骗；且这些基因只可增强部分再生时代，仅能达成受损CNS一定进度的再生，因此其它未纰漏的基因可能在CNS种植失败中上演着遑急变装。Lin28a基因是蠕虫和哺乳动物细胞发育和功能各类性所必需的，Lin28a转基因小鼠或通过AAV2为载体介导Lin28a过抒发促进毁伤后下行脊髓束和视神经轴突的权贵再生。因此，Lin28a对转换CNS神经元的助长时代至关遑急，可能成为调理CNS毁伤的遑急分子靶点。
少女 自慰天普大学刘易斯·卡茨医学院剖解学和细胞生物学系的探讨者们，在Tg小鼠中或通过AAV 2感染上调Lin 28 a刺激了成年啮齿动物中受损的CST和视神经的权贵和长距离再生，何况还权贵促进了RGC的存活。探讨效果以“Upregulating Lin28a Promotes Axon Regeneration in Adult Mice with Optic Nerve and Spinal Cord Injury”为题发表在Molecular Therapy Molecular Therapy（IF: 12.4）上。
探讨拆伙
1. Lin28卵白在发育小鼠的皮层和视网膜中下调
探讨东谈主员评估了不同庚岁段小鼠的嗅觉通顺皮质和视网膜中Lin 28 a信号的抒发水平。
免疫组织化学和卵白质萍踪法拆伙裸露，在P1-P3（出死后第1—3天）小鼠的皮层和视网膜中检测到Lin28a信号，但跟着时辰推移信号冉冉平缓，在视网膜中信号从P7启动灭亡，皮层中则从P14启动，直到成年。免疫染色标明，在皮层中，Lin28a与NeuN共定位，在视网膜中可与TUJ1共定位。由于Lin 28 a放胆多种细胞类型的助长标准，成年哺乳动物脑和视网膜中Lin 28 a水平的裁汰可能导致发育时代或毁伤后闇练神经元助长时代的裁汰。
2. Thy1启动子上调Tg小鼠CNS区Lin28a的抒发
情色调教为了探讨Lin28a基因在闇练核心神经系统的功能，探讨者将Lin28a的cDNA克隆到Thy1载体的XhoI位点，设置了Tg转基因小鼠。接着，通过免疫染色和卵白萍踪考证了视网膜、脊髓灰质和通顺皮质，尤其是第4、5层的Lin28a抒发上调，皮质中约80%的NeuN阳性细胞以及视网膜中约50%TUJ1阳性细胞裸露Lin28a的强信号。
3. 上调Lin28a刺激脊髓毁伤（SCI）的成年Tg小鼠中CSTs强再生
CST轴突是畅达皮层和脊髓的径直投射纤维，关于躯壳和看成的自发通顺放胆至关遑急，但再生它们的战术颠倒有限。因此，探讨东谈主员对成年Tg小鼠T8节段背侧进行半切，并于7周后使用BDA进行示踪不雅测CST再生。在Lin28a Tg小鼠中检测到好多绕过或穿过病变并投射到尾部脊髓中的CST轴突，CSTs和突触素1（Syn）双重绚烂标明，在毁伤尾侧脊髓中，再生的CST轴突存在突触结构。探讨员以盲法评估SCI后Lin28a Tg小鼠的功能规复。在背侧过度半切SCI后两天，悉数小鼠具有通常的毁伤严重进度，BMS通顺评分为3。毁伤后数周，与WT对照组的部分规复，并在3—5周达到平台不同，Lin28a Tg小鼠BMS评分在伤后4—8周握续增长，并大批小鼠具有更好的配合性；值得防备的是，后肢网格行走的评估裸露SCI后8周两组小鼠中网格行走无理的数目通常。因此，上调Lin 28a可改善成年Tg小鼠SCI的轴突再生和功能规复，但雄厚的功能规复可能需要更强的再生。
4. Lin28a Tg小鼠视神经在挤压后再生
在证据Lin28a在包括视网膜在内的多个神经元群体中上调后，探讨员评估了成年WT和Tg小鼠挤压毁伤后17天的视神经轴突再生。以CTB-488为示踪剂示踪视神经轴突，对照组的视神经纤维阻隔于病变部位，Lin28 Tg小鼠裸露强有劲地长距离再生，即便在毁伤30d后，Lin28a Tg小鼠仍然裸露权贵的再生，部分轴突再生穿过病变部位＞3mm，在视交叉中检测到CTB和Syn双阳性信号。此外，上调Lin28a进步了视神经毁伤后RGC的数目。因此，Lin28a上调的Tg促进可握续的视神经再生，何况还防护轴突堵截后RGCs的凋一火。
5. 局部打针AAV 2-Lin 28 a载体灵验上调嗅觉通顺皮层和视网膜中的靶卵白
为了用病毒载体在闇练神经元中过抒发Lin 28 a，探讨者设置了AAV 2—Lin 28 a载体，并打针到C57BL/6小鼠的嗅觉通顺皮质和玻璃体内。打针两周后，与用AAV 2-GFP惩办的对照不同，接纳AAV2-Lin28a载体的小鼠嗅觉通顺皮层和打针侧的视网膜中Lin28a分解上调，Lin28a信号主要与皮质中的NeuN和视网膜中的TUJ1共定位。因此，AAV 2-Lin 28 a载体的局部诈骗灵验地转导成年啮齿动物的嗅觉通顺皮层和视网膜中的闇练神经元。
6. 毁伤后5天寄递的AAV 2-Lin 28 a载体的促进成年小鼠中CST轴突的再生
为了详情在毁伤后上调Lin 28 a是否促进体内轴突再生，探讨东谈主员在闇练C57 BL/6小鼠的T7处进行背侧过度半切，何况5天后将AAV2-GFP或者AAV2-Lin 28 a打针到左侧嗅觉通顺皮层中，以BDA示踪SCI 8W后CST轴突的再生。拆伙裸露用AAV2-Lin 28 a载体惩办的动物在病变区域和尾部脊髓中发达出分解的CST再生，点状Syn信号也共定位于病变脊髓尾部再生的CST轴突，但GFAP染色裸露，对照组和本质组的瘢痕大小通常。这证明局部打针AAV2-Lin28a载体后嗅觉通顺皮层中Lin28a卵白的上调。
7. AAV 2-Lin 28 a载体在玻璃体内调理刺激视神经轴突的权贵再生和RGCs的存活
由于Tg转基因鼠过抒发Lin28a的标准并不适用于调理核心神经轴突毁伤的患者，因此探讨东谈主员在对C57BL/6小鼠进行视神经挤压后，立即向玻璃体内打针AAV2-GFP或者AAV2-Lin 28 a，以CTB绚烂伤后21天视神经再生的轴突。检测拆伙裸露，相较于打针AAV2-GFP，打针AAV2-Lin 28 a促进了视神经权贵再生，并进步了RGC的存活。在毁伤后1d打针AAV2-Lin 28 a并于伤后45d检测再奏效果，发现仍然能达成视神经的长距离再生，部分CTB阳性信号出目下视交叉，远打量神经裸露点状Syn信号。因此，通过病毒感染上调Lin28a抒发能高效地握续雄厚地促进视神经再生，标明编码Lin28a的AAV载体具有弘远的调理后劲。
8. Akt和S6激酶至少部分介导成年小鼠CNS神经元中Lin28a信号传导的作用
Lin28a怎样调控闇练CNS神经元助长的信号通路尚未明确，mTOR信号通路的阻拦剂雷帕霉素大约下调Lin28a的部分功能，因此，探讨东谈主员检测了在成年Tg小鼠嗅觉通顺皮层中上调Lin 28 a是否会改造PI3K-mTOR通路的激酶活性。与同窝WT对照比拟，检测到Tg小鼠的嗅觉通顺皮层中pAkt水平权贵进步以及pS6加多的趋势。Tg小鼠中pAkt和pS6免疫染色的皮质神经元数目加多，而皮质p4E-BP1无变化。在成年Tg小鼠视网膜中pAkt和pS6加多。通过测量嗅觉通顺皮层中Thr44/Tyr42处p1/2 MAPK磷酸化的水温情和Thr172处AMPKα的磷酸化水平，发现检测到Tg小鼠中p-Erk和p-AMPKα水平呈现加多的趋势。Akt、S6激酶或可能是Erk和AMPK的激活介导成年小鼠CNS神经元中Lin 28a的信号传导。
探讨归来
这篇著作通过设置转基因小鼠和病毒载体上调Lin28a的抒发，达成了成年啮齿动物受损的CST和视神经权贵的长距离再生，并促进RGCs的存活。详情用于主管闇练CNS神经元再生的新分子靶点颠倒遑急，包括本探讨中报谈的Lin28a。Lin28a是CNS种植的遑急靶分子，何况其抒发上调对神经系统疾病具有很大的调理后劲，即即是单独激活Lin28a也能促进核心神经系统轴突伤后的强再生，具有转动为临床诈骗的可能性。探讨Lin28a是否也通过突触前转换来放胆其他类型的神经元的再生是很意旨的，将Lin28a 抒发上调与其它促进核心神经系统种植的标准集合合也口舌常值得温文的。
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